流動(dòng)相中加入適量四氫呋喃（THF），主要是為了調(diào)節(jié)洗脫能力、改變選擇性、改善峰形或溶解性。它不是所有方法都需要加，一般是在甲醇/乙腈體系分離效果不理想時(shí)，用來(lái)“微調(diào)”方法。

1. 增強(qiáng)流動(dòng)相洗脫能力

THF 是一種有機(jī)溶劑，反相 HPLC 中洗脫能力通常較強(qiáng)。

在反相色譜中，常見有機(jī)相洗脫強(qiáng)度大致可理解為：

THF > 乙腈 > 甲醇

加入少量 THF 后，可以使疏水性較強(qiáng)的化合物更容易被洗脫出來(lái)，表現(xiàn)為：

保留時(shí)間縮短；

后出峰更快洗脫；

分析時(shí)間縮短；

強(qiáng)保留雜質(zhì)不容易長(zhǎng)期滯留在柱上。

例如某些疏水性藥物、芳香族化合物、脂溶性雜質(zhì)，用甲醇或乙腈洗脫太慢時(shí)，少量 THF 可以明顯改善。

2. 改變選擇性，提高分離度

THF 不只是“更強(qiáng)的有機(jī)相”，它的溶劑性質(zhì)和甲醇、乙腈不同，因此會(huì)改變化合物在固定相和流動(dòng)相之間的分配行為。

它可能影響：

芳香環(huán)化合物的保留；

疏水相互作用；

偶極相互作用；

π-π 作用；

氫鍵相關(guān)作用；

某些異構(gòu)體或結(jié)構(gòu)相近雜質(zhì)的相對(duì)保留。

所以加入 THF 后，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)：

原來(lái)重疊的兩個(gè)峰分開；

峰順序發(fā)生變化；

某些雜質(zhì)峰與主峰分離度提高；

原來(lái)乙腈/水、甲醇/水體系分不開的雜質(zhì)變得可分。

這也是方法開發(fā)中加入 THF 最重要的原因之一：改變選擇性，而不僅僅是縮短保留時(shí)間。

3. 改善峰形

某些化合物在常規(guī)流動(dòng)相中可能出現(xiàn)：

拖尾；

峰寬；

峰分裂；

保留過強(qiáng)；

柱上吸附；

溶解性不足導(dǎo)致峰形異常。

加入少量 THF 有時(shí)可以改善這些問題，尤其是對(duì)一些：

疏水性強(qiáng)的化合物；

芳香性強(qiáng)的化合物；

容易與固定相發(fā)生較強(qiáng)相互作用的化合物；

在甲醇/乙腈體系中溶解性不好的樣品。

不過峰形改善并不一定總是發(fā)生，有些體系中 THF 也可能導(dǎo)致峰形變差，需要實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

4. 改善樣品或雜質(zhì)的溶解性

THF 對(duì)很多有機(jī)化合物溶解能力較強(qiáng)，尤其是一些疏水性、脂溶性或聚合物相關(guān)物質(zhì)。

加入 THF 后可能有助于：

防止樣品析出；

減少柱頭沉積；

改善進(jìn)樣重復(fù)性；

洗脫強(qiáng)吸附雜質(zhì)；

提高疏水雜質(zhì)回收率。

但樣品溶劑中 THF 含量過高時(shí)，也可能因?yàn)槿軇?qiáng)度太大導(dǎo)致峰前伸或變寬，所以進(jìn)樣溶劑還要與初始流動(dòng)相匹配。

5. 降低某些流動(dòng)相體系的黏度和柱壓

與甲醇相比，THF/水體系在某些比例下黏度較低，可能降低柱壓。

但實(shí)際柱壓還與比例、溫度、柱子規(guī)格有關(guān)，不能簡(jiǎn)單認(rèn)為加 THF 一定降壓。

6. 常見加入比例

THF 通常不是大量加入，而是作為第三有機(jī)溶劑少量使用。

常見比例例如：

1%；

2%；

3%；

5%；

10%。

很多方法中只是加入 少量 THF 來(lái)調(diào)節(jié)選擇性，例如：

乙腈-水-THF

甲醇-水-THF

緩沖鹽水溶液-乙腈-THF

具體比例要通過分離度、保留時(shí)間、柱壓和峰形來(lái)優(yōu)化。

7. 使用 THF 的注意事項(xiàng)

1. UV 截止波長(zhǎng)較高

THF 的 UV 截止波長(zhǎng)大約在 212 nm 左右，且不同品質(zhì)、穩(wěn)定劑和氧化程度會(huì)影響背景吸收。

如果檢測(cè)波長(zhǎng)很低，例如：

200 nm；

205 nm；

210 nm；

使用 THF 可能導(dǎo)致：

基線噪聲升高；

背景吸收增加；

梯度洗脫時(shí)基線漂移；

靈敏度下降。

所以低波長(zhǎng) UV 檢測(cè)時(shí)要謹(jǐn)慎。

2. 容易氧化生成過氧化物

THF 長(zhǎng)時(shí)間接觸空氣和光照，可能形成過氧化物，存在安全隱患，也可能影響基線和柱壽命。

因此應(yīng)注意：

使用 HPLC 級(jí) THF；

避光保存；

開瓶后盡快使用；

不使用長(zhǎng)期存放、顏色異常或來(lái)源不明的 THF；

必要時(shí)檢測(cè)過氧化物。

3. 對(duì)某些材料不兼容

THF 對(duì)部分塑料、密封件、管路材料有溶脹或溶解作用。

使用前要確認(rèn)系統(tǒng)兼容性，尤其是：

PEEK 管路；

某些密封圈；

某些塑料接頭；

某些在線過濾器材質(zhì)。

一般不銹鋼系統(tǒng)更耐受，但仍應(yīng)查看儀器和柱子的說(shuō)明書。

4. 不是所有色譜柱都適合 THF

多數(shù)普通硅膠基 C18 柱可以短期或適量使用 THF，但仍應(yīng)看說(shuō)明書。

特別要注意：

手性柱，尤其涂覆型多糖手性柱，THF 可能破壞涂覆層；

聚合物基質(zhì)柱，溶脹風(fēng)險(xiǎn)不同；

SEC/GPC 柱，溶劑兼容性必須嚴(yán)格匹配；

氨基柱、特殊鍵合相柱，也要查兼容性。

5. 與鹽類緩沖液混合時(shí)要防止析鹽

THF 與高鹽水相混合時(shí)，可能改變鹽的溶解度。若緩沖鹽濃度較高，可能出現(xiàn)：

析鹽；

篩板堵塞；

柱壓升高；

管路堵塞。

所以加入 THF 的體系中，緩沖鹽濃度不宜太高，流動(dòng)相配好后應(yīng)觀察是否澄清，必要時(shí)過濾。

8. 簡(jiǎn)單總結(jié)

流動(dòng)相中加入適量 THF，主要作用是：

增強(qiáng)洗脫能力，縮短強(qiáng)保留化合物的保留時(shí)間；

改變色譜選擇性，提高某些相近雜質(zhì)或異構(gòu)體的分離度；

改善疏水性化合物的峰形和溶解性；

幫助洗脫強(qiáng)吸附或脂溶性雜質(zhì)。

但 THF 也有缺點(diǎn)：低波長(zhǎng)背景吸收較高、易氧化、對(duì)部分材料和特殊色譜柱不兼容、可能導(dǎo)致析鹽或基線漂移。因此它通常作為方法優(yōu)化中的輔助有機(jī)相，比例不宜盲目增加，最好結(jié)合柱說(shuō)明書和系統(tǒng)兼容性來(lái)使用。